Séparation

Différentes techniques de séparation peuvent être utilisées pour enrichir certaines molécules (ADN, ARN, protéines, organelles, vésicules, micelles, cellules, etc.) spécifiquement à partir de mélanges biologiques complexes (cellules et homogénats de tissus, sang, urine et autres fluides biologiques), de façon à pouvoir les étudier séparément. La séparation de ces fluides peut être basée soit sur la différence de vitesse de sédimentation des différentes particules dans un fluide ou sur leur différence de densité. La centrifugation en gradient de densité (nommée aussi, centrifugation en bande, à l’équilibre ou isopycnique) exploite le principe de l’équilibre des particules d’une certaine densité dans une solution environnante de densité équivalente.
La première application de la centrifugation en gradient a été publiée dans les années 1950. Depuis, les organelles cellulaires sont enrichies grâce à des gradients de saccharose. Il est incontestable que le savoir acquis sur ces produits enrichis a contribué à établir les bases de la biologie moderne. Il a été découvert depuis peu que l‘enrichissement en cellules de mammifères demandait des milieux de séparation plus complexes du fait de leur sensibilité aux fluctuations osmotiques. Noble et Boyum ont décrit une méthode permettant de séparer les cellules mononuclées du sang total et de la moelle épinière en 1967 et 1968. Sur la base de ces travaux scientifiques, de nombreuses applications biomédicales en recherche et en diagnostic de routine requièrent des populations de cellules intactes viables et fonctionnelles comme matériel de départ. La séparation de telles cellules par gradient de densité est la méthode la plus largement utilisée de par sa simplicité et sa robustesse.